Koyunlarda maternal plazmadan fötal cinsiyet tayininde fenol-kloroform izolasyon metodu ile iki farklı ticari izolasyon kitinin kullanılabilirliği

Basit Öğe Kaydı
dc.contributor.authorKaya, Mehmet Salih
dc.contributor.authorBozkaya, Faruk
dc.contributor.authorKöse, Mehmet
dc.contributor.authorDursun, Şükrü
dc.contributor.authorKırbaş, Mesut
dc.contributor.authorBülbül, Bülent
dc.contributor.authorAydilek, Nurettin
dc.contributor.authorBayrıl, Tahir
dc.contributor.authorAtlı, Mehmet Osman
dc.date.accessioned2019-06-14T07:04:36Z
dc.date.available2019-06-14T07:04:36Z
dc.date.issued2016
dc.departmentVeteriner Fakültesi
dc.descriptionDursun, Şükrü (Aksaray, Yazar)
dc.description.abstractKoyunlarda fötal cinsiyetin belirlenmesinde kullanılan yöntemlerden biri maternal plazmadaki fötal DNA’ların Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) ile çoğaltılmasına dayanır. Ancak, maternal plazmadan izole edilen DNA miktarı ve kalitesi, kullanılan DNA izolasyon yöntemine göre önemli ölçüde değişebilmektedir. Bu çalışmada, üç farklı DNA izolasyon metoduyla koyun maternal plazmasından izole edilen DNA’ların PZR ile çoğaltılarak fötüs cinsiyetlerinin belirlenmesi amaçlandı. Bu amaçla, gebeliğin 20. haftasındaki 13 adet koyundan plazma örnekleri alındı ve doğum sonrası yavruların cinsiyetleri doğrulandı. Pozitif kontrol amacıyla iki adet koç plazması, negatif kontrol amacıyla ise iki adet gebe olmayan koyun plazması kullanıldı. Maternal plazmadan fenol-kloroform izolasyon metodu ve iki farklı ticari nükleik asit izolasyon kiti (QIAamp ve FitAmp) kullanılarak DNA izole edildi. İzole edilen DNA örneklerinden X ve Y kromozomları üzerindeki Amelogenin ve SRY (Sex-determining Region Y) genlerinin hedef bölgeleri PZR yöntemi ile çoğaltıldı. Ticari nükleik asit izolasyon kitleriyle elde edilen DNA’lardan SRY ve Amelogenin primerleri ile yapılan farklı PZR işlemlerinde fötüs cinsiyetinin belirlenmesine yönelik spesifik PZR ürünleri elde edilemedi. Diğer taraftan, fenol-kloroform izolasyon metoduyla izole edilen DNA örneklerinden 10’unda (7 erkek ve 3 dişi fötal DNA içeren örnekte) fötüs cinsiyeti doğru bir şekilde teşhis edildi (10/13). Ancak erkek fötüs taşıyan üç koyundan elde edilen DNA örneklerinden erkek cinsiyet teşhisine özgü PZR ürünleri elde edilemedi (3/13). Çalışmanın sonuçları koyunlarda maternal plazmadan DNA izolasyonunda iki farklı ticari nükleik asit izolasyon kiti kullanıldığında fötal cinsiyetin tespit edilemediğini, diğer taraftan fenol-kloroform izolasyon metodu ile fötal cinsiyet teşhisi yapılabildiğini, ancak bu metodun da hatalı sonuçlara neden olabildiğini göstermiştir.
dc.description.abstractOne of the methods used for determining fetal sex in sheep depends on amplification of fetal DNA in maternal plasma by polymerase chain reaction (PCR). However, quantity and quality of the DNA isolated from the maternal blood plasma can vary significantly depending on the DNA isolation method used. In this study aimed to determine fetal sex in maternal blood plasma by using three different DNA isolation methods. Plasma samples were collected from 13 ewes at 20th week of pregnancy and the genders of the fetuses were confirmed after birth. Plasma samples were collected from two rams as positive control and from two non-pregnant ewes as negative control. Free circulating DNA in maternal plasma samples was isolated by using phenol-chloroform isolation method and two different commercial DNA isolation kits (QIAamp and FitAmp). The obtained free circulating DNA was used for amplifying the target regions of X- and Ychromosome specific Amelogenin and SRY (Sex-determining Region Y) genes, respectively. Commercial isolation kits did not yield a PCR product of SRY or Amelogenin genes. On the other hand, the fetal sex correctly identified in 10 DNA samples (in three female and seven male fetal DNA including samples) isolated by using phenol-chloroform isolation method (10/13). However, in three samples including male fetal DNA fetal sex were incorrectly identified (3/13), because male sex specific PCR products were not obtained. The results of the study suggested that detection of fetal sex in sheep could not be achieved when two different commercial DNA isolation kits were used for DNA isolation from maternal plasma while phenol-chloroform isolation method was successful for this purpose, although incorrect results could also be obtained when this method was used.
dc.identifier.endpage56en_US
dc.identifier.issn2146-717X
dc.identifier.issue1en_US
dc.identifier.startpage50en_US
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12451/1326
dc.identifier.volume5en_US
dc.indekslendigikaynakTR-Dizin
dc.language.isotr
dc.publisherHarran Üniversitesi
dc.relation.ispartofHarran Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi
dc.relation.publicationcategoryMakale - Ulusal Hakemli Dergi - Kurum Öğretim Elemanı
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.subjectFötal Cinsiyet Tayini
dc.subjectMaternal Plazma
dc.subjectNükleik Asit İzolasyonu
dc.subjectKoyun
dc.subjectFetal Sex Determination
dc.subjectMaternal Plasma
dc.subjectNucleic Acid İsolation
dc.subjectSheep
dc.titleKoyunlarda maternal plazmadan fötal cinsiyet tayininde fenol-kloroform izolasyon metodu ile iki farklı ticari izolasyon kitinin kullanılabilirliği
dc.title.alternativeSuitability of two different commercial ısolation kits and phenol-chloroform ısolation method for fetal sex determination from maternal plasma in sheep
dc.typeArticle

Dosyalar

Orijinal paket
Listeleniyor 1 - 1 / 1
Küçük Resim
İsim:
kaya-mehmet salih-2016.pdf
Boyut:
401.75 KB
Biçim:
Adobe Portable Document Format
Açıklama:
Tam Metin / Full Text
İndir
Lisans paketi
Listeleniyor 1 - 1 / 1
[ X ]
İsim:
license.txt
Boyut:
1.44 KB
Biçim:
Item-specific license agreed upon to submission
Açıklama:
İndir

Koleksiyon

Makale Koleksiyonu
TR-Dizin İndeksli Yayınlar Koleksiyonu