DNA saflaştırılmasına yönelik bakteriyel kökenli ekstraselüler biyopolimer kompozit kriyojellerin İMAK uygulamaları
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2018
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Aksaray Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Bu çalışmada, DNA'nın etkili bir yolla ayrılması için kullanılan afinite kromatografisi metotları arasında olan ve son zamanlarda yoğun bir uygulama sahası bulan, immobilize metal afinite kromatografisinden (İMAK) yararlanılmıştır. Çalışmada, Fe+3 bağlı EPS-poli(2-hidroksietil metakrilat) kompozit kriyojeller sentezlenmiştir. Bu amaçla, 2-hidroksietil metakrilat (HEMA) monomer olarak, N,N?-metilen-bis-akrilamid (MBAAm) çapraz bağlayıcı olarak, amonyum persülfat (APS)/ N,N,N´,N´-tetrametiletilen diamin (TEMED) başlatıcı/aktivatör olarak kullanılmıştır. Poimerizasyon ortamına ekstraselüler polimerik maddeler (EPS)'in eklenmesinin ardından, karışım 2,5 mL'lik plastik şırıngalara dökülmüş ve -12°C'de polimerizasyona bırakılmıştır. Sentezlenen kompozit kriyojellere, Fe+3 iyonu bağlandıktan sonra, taramalı elektron mikroskobu (SEM) ve şişme testleri ile karakterize edilmiştir. pH, başlangıç DNA konsantrasyonu, iyonik şiddet, akış hızı ve sıcaklığın adsorpsiyon üzerine etkisi araştırılmıştır. En yüksek adsorpsiyon değeri pH 6 asetat tamponunda, 2 mg/mL başlangıç DNA derişiminde, 0,5 mL/dk akış hızında ve 25°C ortam sıcaklığında 39,66 mg/g polimer olarak gözlenmiştir. Aynı zamanda, Fe+3 bağlı EPS-PHEMA kompozit kriyojellere DNA'nın defalarca adsorplanıp desorplanabildiği gözlenmiştir.
In this study, Immobilized Metal Affinity Chromatograph (IMAC) finding a wide field of application among affinity chromatography techniques in the last years was operated efficiently for separation of DNA from aqueous solutions. In the study, Fe+3 binded EPS- poly(2-hydroxyethyl methacrylate) composite cryogels was synthesized. For this aim, as monomer 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA), as cross-linker N,N´-methylene-bis-acrylamide (MBAAm), as initiator/activator pairs ammonium persulfate (APS) and N,N,N´,N´- tetramethyl ethylene diamine (TEMED) were used. After adding of extracellular polymeric substances (EPS) to polymerizaton media, obtained mixture was poured into a plastic syringe of 2,5 mL and left for polymerization in -12°C. After binding of Fe+3 ions, Fe+3 binded EPS PHEMA composite cryogels were analyzed by, SEM, swelling tests measurements. The effect of pH, initial DNA concentration, ionic strength, flow rate and temperature on adsorption were conducted. The highest amount of DNA adsorption from aqueous solution was 39,7 mg/g particles in acetate buffer at pH 6 with initial DNA concentration of 2 mg/mL with the 0,5 mL/min flow rate, at 25 ºC temperature. It was also made observation that DNA could be over and over adsorbed and desorbed on the Fe+3 binded EPS-PHEMA composite cryogels.
In this study, Immobilized Metal Affinity Chromatograph (IMAC) finding a wide field of application among affinity chromatography techniques in the last years was operated efficiently for separation of DNA from aqueous solutions. In the study, Fe+3 binded EPS- poly(2-hydroxyethyl methacrylate) composite cryogels was synthesized. For this aim, as monomer 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA), as cross-linker N,N´-methylene-bis-acrylamide (MBAAm), as initiator/activator pairs ammonium persulfate (APS) and N,N,N´,N´- tetramethyl ethylene diamine (TEMED) were used. After adding of extracellular polymeric substances (EPS) to polymerizaton media, obtained mixture was poured into a plastic syringe of 2,5 mL and left for polymerization in -12°C. After binding of Fe+3 ions, Fe+3 binded EPS PHEMA composite cryogels were analyzed by, SEM, swelling tests measurements. The effect of pH, initial DNA concentration, ionic strength, flow rate and temperature on adsorption were conducted. The highest amount of DNA adsorption from aqueous solution was 39,7 mg/g particles in acetate buffer at pH 6 with initial DNA concentration of 2 mg/mL with the 0,5 mL/min flow rate, at 25 ºC temperature. It was also made observation that DNA could be over and over adsorbed and desorbed on the Fe+3 binded EPS-PHEMA composite cryogels.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Afinite, DNA, Kompozit Kriyojel, İMAK, Adsorpsiyon, Affinity, Composite Cryogel, IMAC, Adsorption
