Nevşehir patatesinden (Solanum Tuberosum L.)polifenol oksidaz enziminin afinite kromatografisi ile saflaştırılarak kinetik ve elektroforetik özelliklerinin incelenmesi
Yükleniyor...
Tarih
2013
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Aksaray Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Bu çalışmada ekonomik öneme sahip olan Nevşehir patatesinden (Solanum Tuberosum L.) PPO enzimi amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz işlemlerini takiben uygulanan afinite kromatografisi yöntemi ile saflaştırılarak karakterize edilmiştir. Kullanılan afinite jeli Sepharose-4B-L-tirozin-p-aminobenzoik asit kimyasal yapısına sahiptir. Nevşehir patatesinden PPO enzimi % 15.16 verim ve 52.25 saflaştırma derecesi ile elde edilmiştir. Farklı substratlar için optimum pH ve sıcaklık taraması yapılmıştır. Saflaştırılan enzim L-tirozin ve p-kresol substratlarına karşı hiçbir aktivite göstermezken, katekol, gallik asit ve pirogallol substratlarına karşı oldukça yüksek bir akivite göstermiştir. Bu sonuçlar Nevşehir patatesi PPO enzminin monofenolaz (kresolaz) aktivitesinde yoksun olduğunu ve sadece difenolaz (katekolaz) aktivitesine sahip olduğunu göstermektedir. Optimum pH ve sıcaklık çalışmalarında en yüksek aktiviteyi pH 7 ve 20 0C ' de katekol substratı ile elde edilmiştir. Katekol substratı için KM ve Vmaxdeğerleri sırasıyla, 5 mM ve 5000 U/mLdak olarak bulunmuştur. Altı farklı inhibitör için IC50 ve Ki değerleri tespit edilmiştir. Askorbik asitin enzim üzerinde en güçlü inhibitör etkisi gösterdiği gözlenmiştir.
In this work, polyphenol oxidase (PPO) enzyme, which has an economic value, was purified from Nevşehir potato (Solanum Tuberosum L.)with affinity chromatography following the ammonium sulphate precipitation and dialysis and then it was characterized. Utilized affinity gel has chemicallySepharose-4B-L-tirozin-p-aminobenzoic acid nature. PPO enzyme was obtained from Nevşehir potato with 15.16 % efficiency and 52.25 purification degree. Optimum pH and temperature studies were carried out for different substrates. Purified enzyme showed no activity against L-tyrosine and p-cresol, whereas it exhibited the maximum PPO activity against catechol, gallic acid, pyrogallol substrates. These results indicate that PPO enzyme in Nevşehir potato lacks in monophenolase (cresolase)activity and has only diphenolase (catecholase) activity. In optimum pH and temperature studies, catechol showed the maximum activity at pH 7.0 and 20 0C. KM and Vmax values for catechol substrate were determined as 5 mM and 5000 U/mLmin, respectively. IC50 and Ki values for six different inhibitors were determined. It was observed that ascorbic acid has the highest inhibition effect on the enzyme.
In this work, polyphenol oxidase (PPO) enzyme, which has an economic value, was purified from Nevşehir potato (Solanum Tuberosum L.)with affinity chromatography following the ammonium sulphate precipitation and dialysis and then it was characterized. Utilized affinity gel has chemicallySepharose-4B-L-tirozin-p-aminobenzoic acid nature. PPO enzyme was obtained from Nevşehir potato with 15.16 % efficiency and 52.25 purification degree. Optimum pH and temperature studies were carried out for different substrates. Purified enzyme showed no activity against L-tyrosine and p-cresol, whereas it exhibited the maximum PPO activity against catechol, gallic acid, pyrogallol substrates. These results indicate that PPO enzyme in Nevşehir potato lacks in monophenolase (cresolase)activity and has only diphenolase (catecholase) activity. In optimum pH and temperature studies, catechol showed the maximum activity at pH 7.0 and 20 0C. KM and Vmax values for catechol substrate were determined as 5 mM and 5000 U/mLmin, respectively. IC50 and Ki values for six different inhibitors were determined. It was observed that ascorbic acid has the highest inhibition effect on the enzyme.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Nevşehir Patatesi, Polifenol Oksidaz, Afinite Kromotografisi, İnhibisyon, Optimum pH ve Sıcaklık, Nevşehir Potato, Polyphenol Oxidase, Affinity Chromatography, İnhibition, Optimum pH and Temperature
