Odabaşı, MehmetBani, Nurullah2019-07-122019-07-1220182018-07-19https://hdl.handle.net/20.500.12451/2224Bu çalışmada, endüstriyel açıdan son derece önemli bir enzim olan ?-amilazın efektif bir yöntemle ortamdan saflaştırılması için afinite kromatografisi metotlarından popüler bir yöntem olan immobilize metal afinite kromatografisinden (İMAK) yararlanılmıştır. Polimerizasyon için, monomer olarak poli(2-hidroksietil metakrilat) (PHEMA), ko-monomer olarak glisidil metrakrilat (GMA), çapraz bağlayıcı olarak N,N´-metilen-bis-akrilamid, metal bağlayıcı olarak ekstraselüler polimerik maddeler (EPS), başlatıcı/aktivatör olarak N,N,N´,N´-tetrametilen diamin (TEMED)/amonyum persülfat (APS) ve gözenek oluşturucu olarak da etanol kullanılmıştır. Radikal kopolimerizasyon yöntemiyle PHEMA bazlı kompozit membranlar, petri kabında sentezlenmiştir. Daha sonra Cu2+ iyonları membranlara EPS'ler üzerinden takılmıştır. Hazırlanan Cu2+-takılı EPS katkılı membranlar taramalı elektron mikroskobu (SEM), şişme testleri ile karakterize edilmiştir. Sulu ortamdan ?-amilaz adsorpsiyonuna pH'nın, ?-amilaz başlangıç derişiminin, sıcaklık ve iyonik şiddet gibi parametrelerin etkisi incelenmiştir. Cu2+-takılı EPS katkılı polimer membranlar üzerine (Cu2+-EPS-EM) en yüksek adsorpsiyon kapasitesi 25ºC?da pH 5 sodyum asetat tamponunda, 2 mg/mL'lik başlangıç ?-amilaz derişiminde 54,2 mg/g polimer, olarak belirlenmiştir. Ayrıca, Cu2+-EPS-PM üzerine enzimin defalarca adsorplanıp desorplanabildiği belirlenmiştir.In this work, IMAC, a popular method of affinity chromatography, has been utilized effectively, for the purification of ?-amylase, which is an important enzyme industrially. For the polymerization, poly (2-hydroxyethyl methacrylate) as monomer, glycidyl methacrylate (GMA) as co-monomer, N,N'-methylene-bis-acrylamide as crosslinker, extracellular polymeric materials (EPS) as metal binding, N,N,N ',N'-tetramethylenediamine (TEMED)/ammonium persulfate (APS) as activator/initiator and ethanol as porogen were used. PHEMA based composite membranes were synthesized in the petri dish by radical copolymerization method. Then, Cu2+ ions were attached to the membranes via EPSs. Prepared Cu2+ attached EPS-mixed membranes were characterized by scanning electron microscopy (SEM), swelling tests. The influence of parameters such as pH, ?-amylase starting concentration, temperature, and ionic strength in ?-amylase adsorption from aqueous medium is investigated. The highest adsorption capacity on Cu2+attached-EPS mixed polymer membranes (Cu2+-EPS-PM) was determined as 54,2 mg /g polymer at pH 5 sodium acetate buffer at 25°C in an initial ?-amylase concentration of 2 mg/mL. Furthermore, it has been determined that the enzyme can be adsorbed and desorbed repeatedly on Cu2+-EPS-PM.trinfo:eu-repo/semantics/openAccessAfinite?-AmilazMembranİMAKAdsorpsiyonEkstraselüler Polimerik Maddeler (EPS)Affinity?-AmylaseMembraneIMACAdsorptionExtracellular Polymeric Materials (EPS)Master Thesis